通知第12/2012/TT-BYT号关于人工授精和体外受精技术流程的实施

 

通知

颁布人工授精和体外受精技术流程

和体外受精

根据二零零七年十二月二十一日第188/2007/NĐ-CP号政府法令关于卫生部职能、任务、权限和组织结构的规定；

根据二零零三年二月十二日第12/2003/NĐ-CP号政府法令关于科学生育方法；

考虑妇幼健康司司长的建议；

卫生部部长颁布人工授精和体外受精技术流程如下：

节 I
总则

第一条 调整范围

本通知规定了人工授精（将精子注入子宫腔）、体外受精和保存精子、卵子、胚胎、睾丸组织的技术流程。

贷款金额

一、妊娠 是指从受精后第九周开始直到分娩或流产为止的过程。

二、生化妊娠 是指血清中β-hCG水平（≥25 mIU/mL）或尿液中的β-hCG水平，在不使用黄体支持hCG的情况下。

三、临床妊娠 是指超声检查发现孕囊的情况。

第二节
人工授精和体外受精技术流程

条3. 对夫妻双方进行不孕症检查和诊断

1. 原则：同时询问病史并进行体检。

2. 对于妻子：

a) 临床检查：

- 全身检查；

- 内科检查；

- 妇科检查、乳房检查。

b) 实验室检查：

- 子宫输卵管造影；

- 内分泌检测（在月经周期的第2至第4天进行，以评估卵巢储备功能）：雌二醇（E2）、促卵泡激素（FSH）、黄体生成素（LH）和抗苗勒管激素（AMH），在任何月经周期内定量黄体酮（在黄体期进行）；

- 超声波检查：发现子宫和卵巢异常，计数月经周期早期的次级卵泡（第2至第4天）；

- 血常规和生化检查；

- 乙型肝炎病毒、梅毒、结核、艾滋病病毒（HIV）检测（注意根据现行艾滋病防控规定进行咨询）；

- 沙眼衣原体检测；

- 其他特殊检查（视患者情况而定）：巨细胞病毒、抗磷脂抗体、乳腺X线摄影、阴道和宫颈细胞学检查、遗传学检测。

3. 对于丈夫：

a) 临床检查：

- 全身检查；

- 内科检查；

- 生殖器检查；

b) 实验室检查：

- 乙型肝炎病毒、梅毒、结核、艾滋病病毒（HIV）检测（注意根据现行艾滋病防控规定进行咨询）；

- 世界卫生组织标准下的精液分析。

条4. 对单身女性进行不孕症检查和诊断

单身女性应按照本通知第三条第二款的规定进行检查和实验室检测。对于为单身女性提供精子的捐赠者，应按照本通知第三条第三款b项的规定进行检测。

第三节
人工授精技术流程

条5. 对采用人工授精方法治疗不孕症的病例进行咨询

1. 要求：

a) 咨询人员是具有不孕症基础知识、咨询技能、了解患者需求、熟悉科学生育政策和相关法律法规的专科医生、助产士或护士；

b) 应设有专门的咨询室，配备有关不孕症咨询的图片、照片和其他辅助工具；

2. 咨询内容：

a) 解释夫妻双方的治疗流程，包括检查、实验室检测、使用促排卵药物（如有必要）、监测促排卵过程、处理精子样本；

b) 预估将精子注入子宫的时间，以及将精子注入子宫的技术流程；

c) 黄体支持后的护理，注入精子后的监测，怀孕后的监测方式；

d) 方法的成功率及婴儿的发展情况；

e) 可能出现的并发症；

f) 治疗费用。

3. 对于要求获取精子样本的情况：应按照本条第二款的规定进行咨询。

条 6. 技术程序精液洗涤和宫腔内人工授精

1. 概述：精液洗涤技术旨在去除死精子和精浆，以获得健康精子样本用于宫腔内人工授精或体外受精。

2. 适应症：

a) 需要进行宫腔内人工授精的情况；

b) 体外受精前的精液洗涤。

3. 准备工作：

a) 丈夫准备：建议在取样前2至7天避免性生活；

b) 设备准备：离心机、显微镜（物镜10倍和40倍，目镜10倍）、操作台、恒温箱（用于保存精液样本）；

c) 耗材准备：尖底试管、注射器、移液管、载玻片、盖玻片、标有夫妻姓名的样本瓶、洗涤液。

4. 程序：

a) 取样：

- 丈夫在取样前2至7天避免性生活；

- 提前准备好处理精液样本的工具，每个样本单独使用并标记夫妻姓名或编号；

- 通过手淫方式采集精液，采集前需清洁双手和生殖器。

b) 精液洗涤：

- 将精液在37摄氏度恒温箱或室温下完全解冻，约30分钟；

- 评估精液参数：体积、解冻时间、pH值、精子密度；

- 选择洗涤方法（梯度洗涤或上游法）；

- 收集约0.3至0.5毫升的洗涤精液用于宫腔内人工授精；

- 再次评估洗涤后精液的密度和活动力。

条 7. 宫腔内人工授精技术程序

1. 概述：宫腔内人工授精是将导管通过宫颈送入子宫，直接注入洗涤后的精液。该方法旨在提高不孕夫妇的妊娠率。

2. 适应症：

a) 适用于以下原因导致的不孕夫妇：

- 男方精子质量差但符合宫腔内人工授精条件；

- 排卵障碍；

- 原因不明的不孕；

- 子宫内膜异位症；

- 宫颈因素引起的不孕；

- 男方无精子，需要从男方获取精液进行女方宫腔内人工授精；

- 精子冷冻保存。

b) 单身女性希望通过此方法生育。

3. 条件：至少有一侧输卵管通畅。

4. 准备工作：

a) 妻子或单身女性准备：可以刺激卵巢发育，并监测卵泡直至排卵，或者在自然周期中不刺激卵巢，丈夫在取样前2至7天避免性生活，精液样本需先洗涤再进行宫腔内人工授精；

b) 准备精液洗涤设备：如第6条第3款第b项本通知所述。此外，还需准备：阴道扩张器、两个消毒夹、生理盐水杯（用于清洗阴道和宫颈）；

c) 准备耗材：1毫升注射器、宫腔内人工授精导管、用于清洗阴道和宫颈的纱布、生理盐水。

5. 程序（适用于妻子或单身女性）：

a) 注射时间：一次在hCG注射后36小时，或两次分别在24小时和48小时后；

b) 女性采取妇科检查姿势，腹部和双腿覆盖无菌垫；

c) 使用生理盐水清洗外阴；

d) 放置阴道扩张器，暴露宫颈；

e) 使用生理盐水清洗阴道和宫颈，然后用干纱布擦干；

f) 将洗涤后的精液吸入已连接导管的注射器；

g) 轻轻插入导管，当其穿过宫颈内口时停止；

h) 缓慢注入精液到子宫腔；

i) 轻轻拔出导管；

j) 移除阴道扩张器，让患者休息30分钟；

k) 黄体支持：宫腔内人工授精后使用黄体酮支持黄体期；

l) 评估怀孕：宫腔内人工授精后14天进行妊娠检测。

第四节
体外受精技术程序

第8条 为一对夫妇提供体外受精咨询

1. 要求：按照本通知第5条第1款的规定执行。

2. 内容：

a) 解释治疗过程，包括临床检查、实验室检测、促排卵方案、用药时间以及用药期间的监测；

b) 预计取卵时间，并解释在此时需要采集精子；

c) 预计胚胎移植时间；

d) 黄体支持和胚胎移植后的监测；

戌) 体外受精方法的成功率；

e) 可能发生的并发症；

己) 治疗费用。

第9条 特殊情况下的咨询

1. 对于请求捐赠卵子的体外受精咨询：

a) 请求捐赠卵子的情况包括高龄、卵巢早衰、卵巢反应不良、遗传异常等；

b) 除本通知第8条第2款规定的夫妻应了解的内容外，还需咨询以下内容：

- 必须有供卵者和受卵者的书面承诺；

- 在供卵者使用促排卵药物期间，受卵者需使用准备子宫内膜的药物；

- 成功率取决于供卵者的年龄；

- 孩子的遗传特性；

- 取卵可能发生的并发症。

2. 对于因丈夫无精子而进行体外受精的咨询：

a) 丈夫将接受睾丸或附睾活检以确定是否有精子，如果有，可以进行体外受精；

b) 解释通过手术（从附睾或睾丸中提取）获取精子的过程，以及使用卵胞浆内单精子注射（ICSI）技术进行体外受精；

c) 咨询成功率和费用；

d) 咨询可能出现的并发症；

戌) 如果无法获得精子，则可能需要使用捐赠者的精子；

e) 使用捐赠精子情况下孩子的遗传特性。

3. 对于请求捐赠胚胎的体外受精咨询：对于希望请求捐赠胚胎的夫妇，按照本条第1款规定执行。

第10条 体外受精（IVF）程序

1. 总则：体外受精（IVF）是一种辅助生殖技术，在培养皿（Petri盘）中使精子与卵子结合。获得的胚胎将被转移到子宫内着床，或者冷冻保存以备后用。

2. 适应症：

a) 因输卵管阻塞导致不孕；

b) 因子宫内膜异位症导致不孕；

c) 因排卵障碍（不排卵、少排卵、多囊卵巢综合症、高龄）导致不孕；

d) 因精液异常导致不孕；

戌) 因不明原因导致不孕；

e) 曾经尝试过宫腔内人工授精但未成功。

3. 禁忌症：因子宫因素导致的不孕。

4. 准备工作：

a) 准备患者（检查、咨询、促排卵）；

b) 准备精子样本（参见精子洗涤部分）；

c) 准备设备工具：阴道超声探头、操作台、CO2培养箱；₂;

d) 准备耗材：取卵针、培养皿、卵子收集盘、各种移液管、各种培养基；

5. 程序：

a) 检查夫妇；

b) 进行必要的基本检查；

c) 评估卵巢储备（激素检测、月经周期初卵泡计数）；

d) 促排卵（短效激动剂方案、拮抗剂方案、长效方案）；

戌) 通过超声波和雌二醇、孕酮、LH激素定量监测卵泡发育；

e) 当条件成熟时注射HCG促进卵泡成熟；

巳) 在注射HCG后34至36小时在超声引导下经阴道取卵；

己) 取卵后立即使用黄体酮支持黄体期；

庚) 同时采集精子并进行洗涤处理；

辛) 将精子与卵子结合，采用传统体外受精（IVF）或卵胞浆内单精子注射（ICSI）方法；

壬) 在37°C和5% CO2或6% CO2环境中培养；₂ 或根据所需培养基的要求；₂ 癸) 16至18小时后检查受精情况；

丑) 继续在培养箱中培养胚胎至第2天、第3天或第5天；

寅) 在第2天、第3天或第5天（囊胚）进行胚胎移植；

卯) 继续使用黄体酮支持黄体期；

辰) 移植后14天或移植囊胚后12天进行β-hCG检测，当β-hCG≥25 mIU/mL时确认怀孕；

巳) 如果怀孕，移植后28天进行阴道超声检查。

r) 阴道超声检查，如果在移植后28天出现生化妊娠。

条11. 体外受精用精液洗涤程序

1. 总则：按照本通知第6条第1款的规定执行。

2. 指征：需要进行精液洗涤以进行体外受精的情况。

3. 准备工作：

a) 准备丈夫：丈夫禁欲2至7天，取精时间为卵泡穿刺日；

b) 准备设备：显微镜、离心机、恒温箱、操作台、计数室；

c) 准备耗材：尖底试管、载玻片、各种洗涤培养基、移液管、注射器；

4. 程序：

a) 取精：按照本通知第6条第4款第a项的规定执行。

b) 精液洗涤：

- 将精液样本在恒温箱中完全解冻30分钟，并记录完全解冻时间；

- 取少量精液评估各项指标：精子密度、pH值、按WHO建议染色评估异常率和存活率；

- 使用“梯度洗涤和上游泳动”方法洗涤精子；

- 收集的沉淀物用于体外受精（用于移植或ICSI）；

条12. 体外受精卵泡穿刺程序

1. 总则：卵泡穿刺是在超声引导下通过阴道穿刺取出卵子的技术，然后与精子在培养皿中进行受精。

2. 指征：所有卵巢刺激后达到取卵条件的情况。

3. 准备工作：

a) 准备妻子或单身女性：刺激卵巢直至成熟卵泡形成；

b) 准备器械：带有阴道探头的超声机、立体显微镜、培养箱；

c) 准备耗材：阴道清洁液、棉球、杯、消毒钳、弯针、手套、试管、穿刺针、注射器（或吸卵机）、拾卵盘、双孔盘、四井盘、各种培养基；

4. 程序：

a) 穿刺时间：人绒毛膜促性腺激素注射后34至36小时；

b) 采用全身麻醉或局部麻醉，可结合镇静剂；

c) 妻子或单身女性在穿刺前禁食，术前排空膀胱；

d) 用生理盐水清洗外阴、阴道、宫颈；

e) 铺设无菌单覆盖患者腿部和腹部；

在穿刺前用卵泡穿刺液冲洗注射器和穿刺针；

g) 在超声引导下依次穿刺每个成熟卵泡和每个卵巢，整个过程需轻柔并保持弱光照明；

h) 立即将穿刺液转移至实验室寻找和收集卵子；

i) 再次冲洗注射器和穿刺针以防卵子滞留；

5. 术后观察：

a) 妻子或单身女性在穿刺后留在休息室；

b) 穿刺后1至2小时内监测脉搏、血压、呼吸频率、腹痛及阴道出血情况；

c) 指导妻子或单身女性术后用药及胚胎移植预约；

6. 并发症：

a) 因穿刺损伤大血管或卵巢导致内出血；

b) 因穿刺损伤肠道或结肠导致感染；

c) 因穿刺损伤膀胱导致膀胱出血。

条13. 胚胎移植程序

1. 概述：胚胎移植是指将一个或多个胚胎植入受体女性的子宫腔内，使胚胎着床的技术。

2. 适应症：所有进行体外受精且有胚胎可移植的情况，应在取卵后第2天、第3天或第5天进行胚胎移植。

3. 禁忌症：无绝对禁忌症，但在某些情况下可能需要推迟胚胎移植，如卵巢过度刺激综合症或子宫内膜尚未准备好时。

4. 准备工作：

a) 准备妻子或单身女性：在取卵后使用孕酮，或者如果进行冷冻胚胎移植或取卵，则使用雌激素和孕酮准备子宫内膜；

b) 准备工具和器械：超声波引导下的胚胎移植机、阴道扩张器、消毒钳、宫颈钳、必要时使用的宫颈扩张器、盛水杯、显微镜；

c) 准备耗材：阴道擦拭纱布、宫颈擦拭棉签、宫颈擦拭液、胚胎移植导管、胚胎移植准备盘；

5. 程序：

a) 移植时间：第2天、第3天或第5天；

b) 将胚胎准备好并放置在盘中，仔细核对姓名和档案号；

c) 妻子或单身女性需憋尿使膀胱充盈；

d) 采取妇科卧位；

e) 清洁外阴区域；

f) 打开阴道扩张器，用胚胎移植液清洁宫颈；

g) 轻柔地将外部导管通过宫颈管推进至宫底，在腹部超声引导下观察；

h) 向胚胎学家通报，当外部导管已推进至宫底时，准备将内部导管中的胚胎吸入；

i) 轻柔地将含有胚胎的内部导管推进到子宫腔内，导管头端距离子宫底部约2厘米；

k) 轻柔地将胚胎放置在子宫腔内，不超过5个胚胎；

l) 轻柔地将导管从子宫腔中取出；

m) 检查导管是否干净，是否有剩余胚胎；

n) 取出阴道扩张器；

o) 妻子或单身女性需休息至少30分钟后再离开；

p) 黄体支持。

条14. 卵胞浆内单精子注射（ICSI）程序

1. 概述：卵胞浆内单精子注射是一种直接将单个精子注入卵子胞浆以实现受精的微操作技术。

2. 适应症：

a) 因严重精液异常（数量少、活力弱、形态异常）导致的不育；

b) 逆行射精；

c) 从附睾或睾丸获取的精子样本；

d) 前次体外受精失败史；

e) 体外成熟卵泡周期（IVM）；

f) 使用解冻卵子的周期；

g) 年龄较大的女性（>40岁）；

3. 准备工作：

a) 准备卵子和精子；

b) 准备工具和器械：显微镜及微操作设备、卵子固定针和注射针、调整显微镜、培养箱；

c) 准备耗材：ICSI盘、培养液、覆盖液；

4. 程序：

a) 通过“浓度梯度-上游法”或“浓度梯度法”准备用于ICSI的精子样本；

b) 取卵后的卵子在温箱中培养1至3小时后进行操作；

c) 准备ICSI盘；

d) 调整显微镜和微操作设备；

e) 进行卵子去核，培养1小时；

f) 进行卵胞浆内单精子注射；

g) 将已注射精子的卵子在37°C、5%CO2培养箱中培养；₂;

h) 在16至18小时后检查受精情况。

条15. 取精技术程序

1. 概要：取精技术是指通过穿刺从附睾或睾丸中取出精子，用于与卵子进行卵胞浆内单精子注射受精的技术。

2. 适应症：无精子症（阻塞性无精子症、Azoospermia）和射精障碍。

3. 禁忌症：生精组织活检后无精子。

4. 咨询：按照本通知第9条第2款的规定执行。

5. 检查：

a) 询问病史；

b) 全身检查；

c) 生殖器检查：测量睾丸、附睾、输精管的体积。

6. 检验：

a) 性激素定量；

b) 基础检验：血液、凝血功能、乙型肝炎、梅毒、结核、HIV。

7. 准备：

a) 患者准备：对丈夫进行咨询检查；

b) 工具准备：消毒钳、纱布、消毒液、生理盐水、消毒液容器、离心机、显微镜；

c) 耗材准备：用于穿刺的注射器及针头、各种清洗过滤用培养基、培养皿。

8. 程序：

a) 全身麻醉或局部麻醉；

b) 用生理盐水清洁生殖器及其周围区域；

c) 固定附睾（如果穿刺附睾），或者固定睾丸；

d) 穿刺附睾或睾丸（可能需要多次穿刺才能获取精子样本）；

đ) 对穿刺部位进行消毒，检查是否有出血或血肿；

e) 在穿刺样本中寻找精子（从附睾穿刺的样本更容易找到精子）；

g) 从样本中过滤并清洗精子以供卵胞浆内单精子注射使用；

h) 指导术后护理。

条16. 冷冻保存精子程序

1. 概要：冷冻保存精子是将精子样本冷冻并在低温环境中储存的技术。必要时可以解冻使用。

2. 适应症：

a) 癌症患者在接受放射治疗前，为避免影响精子质量；

b) 在进行输精管结扎手术前，以防将来想要孩子；

c) 脊髓损伤导致不能自然射精的患者，可以通过电刺激取精并冷冻精子样本；

d) 从附睾或睾丸取精的样本可以冷冻保存，以避免重复活检；

đ) 准备进行辅助生殖技术但丈夫必须外出的情况；

e) 丈夫难以取精：冷冻保存精子以防止妻子已经进行了卵泡穿刺或准备了卵子而没有可用的精子；

g) 捐献精子的情况，将被冷冻保存在精子库中，以供有需求的人使用。

3. 准备工作：

a) 患者准备：采集丈夫的精液样本进行冷冻；

b) 工具准备：精液储存管、储存罐；冷冻机（在使用机器降温的情况下）；

c) 耗材准备：液氮、各种培养基；

4. 缓慢冷冻程序：

a) 根据世界卫生组织的标准评估冷冻前的精子质量；

b) 通过将精液放入储存管中，然后按一定比例加入冷冻保护剂（每1毫升精液加入0.5至1毫升冷冻保护剂），均匀混合（避免产生气泡），室温下放置12至15分钟；

c) 包装：包装储存管，记录患者姓名、编号和冷冻日期；

d) 使用机器程序或手动经验降低温度；

đ) 存储于液氮中：降温后，将储存管连接到铝杆上，并存放在液氮罐中。

条17. 解冻精子程序

1. 概要：解冻精子是指将冷冻并保存在储存容器中的精子样本解冻，然后过滤清洗以供使用。

2. 适应症：

a) 解冻精子用于宫腔内人工授精；

b) 解冻精子用于体外受精。

3. 准备工作：

a) 准备待解冻的精子样本；

b) 准备工具：盛有37℃温水的杯子，用于过滤清洗精子样本的工具（参见精子过滤清洗部分）；

c) 准备消耗品：用于过滤清洗精子样本的工具。

4. 程序：

a) 将储存精子的管子从液氮中取出，在室温下放置1至3秒，使包裹在外层的冰完全融化；

b) 将储存管放入37℃温水中，持续10至20分钟；

c) 根据世界卫生组织的标准评估解冻后的精子质量；

d) 解冻后的精子样本将被过滤清洗后用于宫腔内人工授精（IUI）或体外受精。

条18. 冷冻睾丸组织程序

1. 概要：冷冻睾丸组织是指通过活检获取睾丸组织并将其冷冻保存。必要时可解冻分离出精子使用。

2. 适应症：无精子症情况下，进行含有精子的睾丸组织活检并冷冻保存，以避免多次活检。

3. 准备工作：

a) 准备患者：检查、咨询；

b) 准备工具器械：消毒钳、装有消毒剂的杯子、刀、剪刀、冷冻机、储存睾丸组织的管子、储存容器；

c) 准备消耗品：培养皿、冷冻介质、液氮、消毒剂。

4. 程序：

a) 进行与取精手术类似的检查、检验和咨询；

b) 进行睾丸组织活检，放入含有清洗介质的盘中清洗；

c) 使用专用镊子撕碎睾丸组织，确定精子的存在，并在倒置显微镜下评估其活动性；

d) 分离每个生精小管以进行冷冻；

f) 向已分离的生精小管中加入并混合冷冻保护剂，摇匀后放入冷冻试管中；

e) 将试管置于室温下，随后按照程序降低温度；

g) 将样本放入液氮罐中保存。

条19. 解冻睾丸组织程序

1. 概要：解冻睾丸组织是指将冷冻并保存在储存容器中的睾丸组织解冻，以便从中分离出精子。

2. 适应症：需要解冻睾丸组织以提取精子用于ICSI的情况。

3. 准备工作：

a) 准备储存睾丸组织的管子；

b) 准备工具器械：显微镜；

c) 准备消耗品：各种类型的精子过滤清洗介质、培养皿。

4. 程序：

a) 将储存睾丸组织的管子从液氮罐中取出，在室温下放置15至30分钟；

b) 用清洗介质清洗睾丸组织；

c) 将睾丸组织样本放入含有IVF介质的培养皿中，进行撕碎操作以寻找精子；

d) 评估精子的活动性；

f) 在37℃、5%CO2条件下培养精子24小时；₂ 37 ||| e) 再次评估精子的活动性并用于ICSI。

e) 重新评估精子的活动力，并用于ICSI。

条 20. 冷冻卵子程序

1. 概述：冷冻卵子是指从卵巢取出卵子，进行冷冻并保存在低温环境中。当女性准备怀孕时，卵子将被解冻，并通过ICSI方法与精子受精，然后将胚胎移植到子宫内。

2. 适应症：

a) 需要手术切除卵巢的病理情况；

b) 在取卵后无法获得精子样本的情况；

3. 准备工作：

a) 准备患者：刺激卵巢，取卵，分离颗粒细胞；

b) 准备工具和设备：培养皿，液氮储存盒，卵子储存针，卵子储存管，显微镜；

c) 准备消耗品：移液管，注射器，液氮，用于冷冻卵子的各种环境介质；

4. 程序：

同样类似于冷冻胚胎的方法，有多种冷冻卵子的方法，但目前使用玻璃化冷冻法因其优点而被大多数生殖中心采用。

卵子应在取卵后2至6小时内进行玻璃化冷冻，并在卵子从颗粒细胞中分离出来后立即进行。评估卵子质量，在冷冻前记录所有参数。根据具体使用的环境介质，程序的具体步骤可能会有所不同。

a) 准备：

- 将洗涤溶液（WS），玻璃化溶液（VS）和平衡溶液（ES）置于25°C至27°C的温度下；

- 标记了患者姓名、年龄、冷冻日期的卵子储存针；

- 装有液氮的泡沫盒；

- 冷冻前评估卵子质量；

- 准备培养皿：在培养皿盖上滴一滴WS和三滴ES。在培养皿上滴加VS。

b) 冷冻卵子：

- 平衡：使用移液管将卵子放置在WS滴中，然后用移液管将卵子从WS滴移动到ES滴中，平均时间为3分钟。将卵子从这些滴中转移到最后一滴ES中，卵子将在大约9分钟内恢复原状，如果卵子尚未恢复原状，则可以等待更长时间；

- 玻璃化：使用巴斯德移液管将卵子从ES环境转移到VS环境，吸出ES溶液以清洗卵子，然后使用移液管将卵子吸入储存针中。将储存针浸入液氮中，水平放置以实现快速冷却速度。使用夹具将塑料管安装在储存针上。

（注意：操作时间应在1分钟以内，并尽量减少在吸取卵子进入储存管时带入的环境介质量）

条 21. 解冻卵子程序

1. 概述：解冻卵子是指已经冷冻并储存在储存瓶中的卵子被取出进行解冻，并通过ICSI方法与精子受精。卵子是按照何种方式冷冻的，就应按照该方式解冻。

2. 适应症：需要解冻卵子并与已准备好子宫内膜接受者的卵子进行ICSI受精的情况。

3. 准备工作：

a) 准备患者：为接受者准备子宫内膜，解冻卵子后的ICSI所需精子样本，准备将要解冻的卵子储存管；

b) 准备工具器械：显微镜；

c) 准备消耗品：各种环境介质，培养皿，移液管。

4. 程序：

a) 准备：

- 将解冻溶液（TS）放入培养皿并在37°C的培养箱中至少放置30分钟；

- 放置含有稀释溶液（DS），洗涤溶液1（WS1）和WS2的培养皿，标记解冻培养皿上的患者姓名，将各种环境介质放在培养皿的不同格子中；

b) 解冻：

- 检查储存针上的姓名，病历号，存储日期和患者姓名；

- 将装有准备好的TS溶液的培养皿放在显微镜下，从液氮中取出的卵子储存针立即浸入TS溶液培养皿中60秒；

- 使用移液管吸取一些TS溶液和卵子，转移至DS溶液培养皿中3分钟；

- 继续吸取卵子，将其转移至WS1溶液培养皿中5分钟；

- 将卵子转移至WS2溶液培养皿中5分钟；

- 最终将卵子转移至预先准备好的培养基培养皿中，评估卵子形态和质量。可以在2小时后进行ICSI。

条 22. 冷存胚胎程序

1. 概要：冷存胚胎是指将胚胎冷冻并保存在低温环境中的一种技术。当女性准备怀孕时，胚胎会被解冻并移植到子宫内。

2. 适应症：

a) 胚胎移植后有剩余胚胎的情况；

b) 存在卵巢过度刺激风险或已发生卵巢过度刺激的情况；

c) 卵巢未准备好子宫内膜以接受卵子的情况；

d) 子宫内膜不适宜的情况。

3. 禁忌症：无禁忌症，但质量差的胚胎通常不会被冷冻，因为这些胚胎解冻后的退化率较高。

4. 准备工作：

a) 准备冷存胚胎；

b) 准备工具和设备：冷冻针、冷冻罐、吸管、注射器、显微镜；

c) 准备消耗品：培养皿、装液氮的泡沫盒、液氮、冷冻胚胎所用的各种培养基。

5. 程序：

冷存胚胎的方法多种多样，但玻璃化冷冻法因其诸多优点而被大多数生殖中心采用。

在进行胚胎冷冻前，评估胚胎质量，并记录所有参数。

a) 准备：

- 玻璃化溶液（VS）和平衡溶液（ES），室温25°C至27°C；

- 标记了患者姓名、年龄、冷冻日期的冷冻针（Cryotop）；

- 装有液氮的泡沫盒；

- 冷冻前评估胚胎质量；

- 准备培养皿：第一格加入300µl ES，第二格加入300µl VS。

b) 冷存胚胎：

- 平衡：使用吸管将胚胎从培养基转移到ES溶液中，15分钟内观察显微镜下胚胎是否恢复原大小；

- 玻璃化：使用巴斯德吸管将胚胎从ES溶液转移至VS溶液中，上下移动吸管改变胚胎位置，然后将胚胎放置在冷冻针上，用巴斯德吸管吸去多余液体并将冷冻针浸入液氮中。此过程应在30秒内完成，最长不超过1分钟。

条 23. 解冻胚胎程序

1. 概要：解冻胚胎是将已经冷冻并保存在储存罐中的胚胎取出解冻，随后移植到受体子宫内的技术。胚胎按照何种方法冷冻，则按相同方法解冻。

2. 适应症：子宫内膜条件适合胚胎移植的情况。

3. 准备工作：

a) 准备患者：为接受胚胎的患者准备子宫内膜；

b) 准备工具和设备：显微镜、培养箱；

c) 准备消耗品：培养皿、四孔板、各种用于解冻胚胎的培养基。

4. 程序：

a) 准备：

- 将解冻溶液（TS）放入培养皿中，在培养箱37°C下至少预热30分钟；

- 将稀释溶液（DS）放入四孔板的第一格，洗涤溶液1（WS1）放入第二格，洗涤溶液2（WS2）放入第三格，并在解冻板上标记患者姓名，将各种培养基放入相应格中；

b) 解冻：

- 检查冷冻针上的患者姓名、档案号、存储日期；

- 将含有解冻溶液（TS）的培养皿放在显微镜下，将冷冻针或卵子从液氮中取出后立即浸入解冻溶液（TS）中1分钟；

- 将胚胎转移到含有稀释溶液（DS）的格中3分钟；

- 将胚胎转移到含有洗涤溶液1（WS1）的格中5分钟；

- 将胚胎转移到含有洗涤溶液2（WS2）的格中再次清洗；

- 将胚胎转移到预先准备好的IVF培养基中，置于CO2培养箱37°C下，评估解冻后的胚胎质量。₂，温度37°C，评估解冻后的胚胎质量。

c) 可以在解冻胚胎后2至3小时内移植胚胎，或者将胚胎培养过夜并在第二天移植。

条 24. 冷冻胚胎移植（FET）程序

1. 概述：冷冻胚胎移植是指将一个或多个冷冻胚胎解冻后移植到已经准备好的子宫内膜受体的子宫腔中。

2. 适应症：有冷冻胚胎的情况。

3. 禁忌症：无禁忌症，但若子宫内膜未准备好，则可能取消移植周期。

4. 准备工作：

a) 受者准备：准备子宫内膜；

b) 准备器械、工具和耗材：按照本通知第13条第4款b、c项的规定执行。

5. 程序：

a) 在月经周期开始时进行内分泌检测和其他必要的检查；

b) 超声波检查子宫和双侧卵巢；

c) 在月经周期开始时使用雌激素准备子宫内膜；

d) 使用超声波监测子宫内膜的发育情况；

đ) 当条件满足移植胚胎时，在移植前48至72小时内开始使用黄体酮；

e) 将解冻胚胎的信息告知医生；

g) 解冻胚胎，根据冷冻方法选择解冻方法；

h) 将解冻后的胚胎在培养液中培养并放入培养箱；

i) 在移植前评估胚胎的发育情况和质量；

k) 在解冻后3小时或第二天移植冷冻胚胎；

l) 在超声引导下移植胚胎；

m) 继续使用与移植前相同的雌激素和黄体酮剂量；

n) 移植后14天测定β-hCG水平；

o) 如果有生化妊娠，在移植后28天进行超声波检查；

p) 如果怀孕，继续使用雌激素和黄体酮直到第12周。

条 25. 体外成熟卵泡非成熟卵泡培养程序（IVM-Invitro Maturation）

1. 概述：体外成熟卵泡非成熟卵泡培养技术是指从早期阶段取出卵泡，并在培养皿中培养成熟，然后通过显微注射精子使其受精。获得的胚胎可以移植到子宫或冷冻保存。

2. 适应症：对于有卵巢过度刺激风险（多囊卵巢综合症、既往卵巢过度刺激史）的患者，需要进行非成熟卵泡培养以避免卵巢过度刺激。

3. 准备：类似于体外受精，但有一些不同点：

a) 使用IVM针头；

b) 使用培养非成熟卵泡的培养基；

c) 使用过滤网筛选卵泡。

4. 程序：

a) 对患者补充FSH；

b) 监测卵泡囊的发育；

c) 使用hCG；

d) 抽取非成熟卵泡；

đ) 在IVM培养基中体外培养非成熟卵泡，平均时间为24至26小时；

e) 实施卵母细胞胞浆内颗粒细胞分离；

g) 通过显微注射使精子进入卵子胞浆；

h) 在培养箱中培养受精后的卵子；

i) 在受精后16至18小时检查受精情况；

k) 在第2天、第3天或第5天移植胚胎；

l) 移植后14天测定β-hCG水平；

m) 如果有生化妊娠，在移植后28天进行超声波检查。

条 26. 卵子捐赠体外受精程序

1. 概述：卵子捐赠体外受精是指将捐赠者的卵子与受赠者的精子在培养皿中结合受精。获得的胚胎将被移植到已经准备好的子宫内膜受赠者的子宫中着床。

2. 适应症：

a) 对于受赠者：

- 早发性卵巢功能不全；

- 卵子质量差；

- 卵巢反应不良（月经周期初FSH浓度升高，次级卵泡少）；

- 年龄较大（超过40岁）；

- 遗传异常。

b) 对于捐赠者：

- 符合规定的年龄；

- 至少有一个健康的子女；

- 如果正在哺乳，则孩子至少12个月大且不再哺乳；

- 无慢性病或遗传性疾病。

3. 咨询卵子捐赠夫妇：按照本通知第9条第1款的规定执行。

4. 准备：按照本通知第10条第4款的规定执行，但需准备捐赠者和受赠者的子宫内膜。

5. 程序：

a) 对捐赠者进行全面体检、妇科检查和检测；

b) 签订捐赠者和受赠者夫妇之间的承诺书；

c) 调整捐赠者和受赠者的月经周期；

d) 刺激捐赠者的卵巢同时用雌激素准备受赠者的子宫内膜；

đ) 使用超声波和激素测定监测捐赠者的卵泡发育；

e) 使用超声波监测受赠者的子宫内膜；

g) 当卵泡发育成熟时，给捐赠者注射hCG；

h) 抽取捐赠者的卵子，同时给受赠者额外使用黄体酮；

i) 获取受赠者丈夫的精子并清洗；

k) 根据精子质量，使用传统体外受精（IVF）或卵胞浆内单精子注射（ICSI）技术使捐赠者的卵子受精；

l) 受精后16至18小时检查受精情况；

m) 在第2天、第3天或第5天将胚胎移植给受赠者（妻子）；

n) 移植后继续使用雌激素和黄体酮；

o) 移植后14天测定β-hCG水平；

p) 如果有生化妊娠，在移植后28天进行超声波检查；

q) 继续使用雌激素和黄体酮直到第12周。

条 27. 体外受精取精程序

1. 总则：体外受精取精是指使用捐赠者的精子与接受者的卵子在培养皿中进行受精的技术。获得的胚胎将被移植到子宫内着床，或冷冻保存以备后用。

2. 适应症：

a) 丈夫无精子；

b) 遗传异常。

3. 捐精者条件：

a) 不患有传染病；

b) 不患有精神疾病、遗传病；

c) 精液样本符合世界卫生组织的标准。

4. 向申请取精的夫妇提供咨询：按照本通知第9条第2款的规定执行。

5. 准备工作：准备工作类似于常规体外受精，但本例中的精液样本将从捐精者处获取。

6. 程序：

a) 对捐精者进行检查和检测；

b) 提前采集的精液样本已冷冻（参见冷冻程序）；

c) 根据促排卵方案刺激卵巢；

d) 通过超声波和激素定量监测卵泡发育和子宫内膜情况；

e) 当卵泡发育成熟时注射HCG；

f) 抽取卵子，使用孕酮支持黄体功能；

g) 清洗过滤捐精者的精液样本；

h) 使用传统体外受精（IVF）或卵胞浆内单精子注射（ICSI）技术使捐精者的精子与卵子受精，具体取决于精液样本的质量；

i) 将卵子和精子或经过ICSI处理后的卵子置于培养箱中；

k) 受精后16至18小时检查受精情况；

l) 在第2天、第3天或第5天移植胚胎；

m) 移植胚胎后继续使用孕酮；

o) 移植后14天测定β-hCG水平；

p) 如果有生化妊娠，在移植后28天进行超声波检查；

q) 继续使用孕酮支持黄体功能直至第12周。

条 28. 减少选择性胚胎程序

1. 总则：减少选择性胚胎是通过阴道超声引导下使用穿刺针减少多胎妊娠中胚胎数量的技术。

2. 适应症：

a) 胚胎移植后有三个或更多胚胎的情况下，通常保留两个或一个胚胎，视具体情况而定；

b) 对于双胎妊娠，根据具体情况减少一个胚胎。

3. 减少胚胎的时间点：最佳时间点为第七周加三天。

4. 咨询：

a) 减少胚胎的原因；

b) 减少胚胎的过程；

c) 可能发生的并发症。

5. 镇痛方法：全身麻醉或局部麻醉，可结合镇静剂。

6. 准备工作：

a) 准备孕妇：进行血液计数、血型和凝血因子检测；孕妇禁食并在手术前排尿；

b) 准备器械：消毒钳、超声机；

c) 准备耗材；消毒液容器、消毒液、穿刺针、注射器。

7. 程序：

a) 手术前检查并进行麻醉；

b) 用生理盐水清洁外阴、阴道和宫颈；

c) 铺设无菌布覆盖孕妇的腿和腹部；

d) 通过超声重新评估胚胎数量、胚胎状态以及需要减少的胚胎。需要减少的胚胎位于穿刺针路径附近且靠近宫颈；

e) 在超声引导下准确穿刺到需要减少的胚胎位置，当针尖接触胚胎时开始抽吸胚胎；

f) 对于小胚胎可以完全抽吸，对于大胚胎无法完全抽吸时需确保胎儿心跳停止；

g) 对于大胚胎可能需要注入氯化钾进入胎儿心脏；

h) 手术中预防性使用抗生素。

8. 减少胚胎后的观察：

a) 孕妇卧床休息；

b) 手术后两小时内监测脉搏、血压、呼吸频率、腹痛和阴道出血；

c) 安排两天后复查。

9. 并发症：

a) 出血；

b) 穿刺到血管或膀胱；

c) 感染；

d) 流产或死胎。

节5
实施条款

条 29. 生效日期

本通知自2012年8月20日起生效。

第三十条 责任组织实施

妇幼健康司负责主持，与医疗管理司、法制司及相关单位配合组织对本通知的指导、监督、检查和审计工作。

在执行过程中，如遇困难或问题，请有关机关、组织和个人以书面形式向国家卫生健康委员会（妇幼健康司）报告，以便研究和解决。/。